人T淋巴細胞白血病病毒p19（HTLV p19）試(shi)劑盒使用說明書
本試劑盒僅(jin)供研(yan)究使用。
檢測范圍： 48T
1pg/ml -50 pg/ml
使(shi)用目(mu)的：
本試劑(ji)盒用于測定人血清(qing),血漿及(ji)相關液體樣本中T淋巴細胞白(bai)血(xue)病(bing)病(bing)毒p19（HTLV p19）含量。
實驗原理
本試劑盒應(ying)用雙抗體夾心法(fa)測(ce)定標本中人T淋巴細(xi)胞白(bai)血(xue)病病毒p19（HTLV p19）水平。用(yong)純化(hua)的(de)人(ren)T淋巴細胞白(bai)血病病毒p19（HTLV p19）抗體包(bao)被(bei)微(wei)孔板(ban)，制成固相抗體，往包(bao)被(bei)單抗的(de)微(wei)孔中依次加入T淋(lin)巴細胞(bao)白(bai)血(xue)病病毒p19（HTLV p19），再與HRP標記(ji)的(de)T淋巴細(xi)胞白血病病毒p19（HTLV p19）抗(kang)體結(jie)合，形成抗(kang)體-抗原-酶標抗體復合物(wu)，經(jing)過che底洗(xi)滌后加底(di)物TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色(se)，并在酸的(de)作(zuo)用下(xia)轉化(hua)成(cheng)最終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品中的(de)T淋巴(ba)細(xi)胞(bao)白血病病毒p19（HTLV p19）呈(cheng)正相關(guan)。用酶(mei)標儀在450nm波長下測(ce)定吸光度（OD值），通過標準曲線(xian)計算樣品(pin)中(zhong)人T淋巴細胞(bao)白血病病毒p19（HTLV p19）濃度(du)。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗(xi)滌(di)液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑(ji) | 3ml×1瓶 | 8 | 標準品（80 pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔(kong)×4條(tiao) | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋(shi)液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液(ye) | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑(ji)B液(ye) | 3ml×1/瓶 | 12 | 密(mi)封袋 | 1個 |
標本要求
1．標(biao)本采(cai)集后盡早進(jin)行(xing)提取，提取按相關(guan)文(wen)獻進(jin)行(xing)，提取后應盡快進(jin)行(xing)實(shi)驗。若不能馬(ma)上進(jin)行(xing)試驗，可將標(biao)本放于-20℃保(bao)存，但應避免反(fan)復凍融
2．不能檢(jian)測(ce)含(han)NaN3的樣品，因NaN3抑制(zhi)辣根過氧化物(wu)酶的（HRP）活性。
操作步驟(zou)
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶(hu)可(ke)按(an)照(zhao)下列圖(tu)表(biao)在小試管中進行稀釋。
40 pg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍(bei)標準品(pin)加入150μl標準品稀釋液(ye) |
20 pg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入(ru)150μl標準品稀釋液 |
10 pg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋(shi)液 |
5 pg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號(hao)標準(zhun)品加入(ru)150μl標準品稀釋液(ye) |
2.5 pg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準(zhun)品加入150μl標準品稀釋液(ye) |
2. 加樣(yang)：分(fen)別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對照孔不加樣(yang)品及酶標(biao)試劑(ji)，其余各步操作相同(tong)）、標(biao)準孔、待(dai)測樣(yang)品孔。在酶標包(bao)被板上標準(zhun)品準(zhun)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋(shi)液40μl，然后再加待(dai)測(ce)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加于(yu)酶標板(ban)孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混(hun)勻。
3. 溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液(ye)：將20倍濃縮洗滌(di)液用蒸餾水20倍(bei)稀釋(shi)后(hou)備用
5. 洗滌：小心(xin)揭掉封(feng)板膜，棄去液(ye)體(ti)，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置(zhi)30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標試(shi)劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操(cao)作同3。
8. 洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光(guang)顯色10分鐘.
10. 終止：每(mei)孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定(ding)：以空白孔調零，450nm波(bo)長依序測量各(ge)孔的(de)吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分(fen)鐘以內進行。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(hui)有(you)結晶析出，稀釋時可在(zai)水浴中加(jia)溫(wen)助溶，洗(xi)滌時不影(ying)響結果(guo)。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每(mei)次(ci)測定的同(tong)時做標準曲(qu)線，最好(hao)做復(fu)孔(kong)。如標本中(zhong)待(dai)測物質含(han)量(liang)過高（樣本OD值大(da)于標準(zhun)品孔(kong)第一(yi)孔(kong)的OD值(zhi)），請先(xian)用樣品稀釋液(ye)稀釋一定倍數（n倍）后再測定(ding)，計(ji)算時請最后乘以(yi)總稀(xi)釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只(zhi)限一次(ci)性使用，以避免交(jiao)叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
