β2-GP,BIM人β2糖蛋白酶聯免疫試劑盒批發

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人β2糖蛋白（β2-GP）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原(yuan)理

試劑盒(he)采用雙抗(kang)(kang)體(ti)一步夾心法酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附試驗（ELISA）。往預先包被人(ren)β2糖蛋白(bai)（β2-GP）捕獲抗(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)包被微(wei)孔(kong)中，依次加入標(biao)本、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記(ji)的(de)(de)檢測(ce)抗(kang)(kang)體(ti)，經過(guo)溫育并*洗滌(di)。用底物TMB顯色，TMB在過(guo)氧化物酶(mei)的(de)(de)催化下轉(zhuan)(zhuan)化成藍色，并在酸的(de)(de)作用下轉(zhuan)(zhuan)化成zui終的(de)(de)黃色。顏色的(de)(de)深淺和樣品中的(de)(de)人(ren)β2糖蛋白(bai)（β2-GP）呈正相關。用酶(mei)標(biao)儀在450nm 波長下測(ce)定吸(xi)光度（OD 值），計算樣品濃度。

β2-GP,BIM人β2糖蛋白酶聯免疫試劑盒批發樣本處理(li)及要求

1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°;C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標(biao)本處理

1.  本(ben)(ben)公司(si)只對試劑盒(he)本(ben)(ben)身負責，不(bu)對因(yin)使(shi)用該試劑盒(he)所(suo)造(zao)成的(de)(de)樣本(ben)(ben)消耗負責，請使(shi)用者使(shi)用前充分考慮到樣本(ben)(ben)的(de)(de)可(ke)能使(shi)用量(liang)，預(yu)留充足的(de)(de)樣本(ben)(ben)。

2.  實驗前應預測標(biao)本(ben)(ben)含量，如果標(biao)本(ben)(ben)濃度過高(gao)，應對標(biao)本(ben)(ben)進行稀(xi)(xi)釋，使稀(xi)(xi)釋后的標(biao)本(ben)(ben)符合試劑盒(he)的檢測范圍，計算(suan)時再乘(cheng)以相應的稀(xi)(xi)釋倍(bei)數。標(biao)本(ben)(ben)使用0.01mol/L的PBS稀(xi)(xi)釋(PH=7.0-7.2)。

3.  若所(suo)檢樣(yang)本不包含在說明書所(suo)列(lie)樣(yang)本之中，建議(yi)進行預實驗驗證其有效性，并注意留存樣(yang)本。

4.  使用化(hua)學裂解液(ye)制備的組織勻(yun)漿或細胞提(ti)取液(ye)可能(neng)會(hui)由于(yu)某些化(hua)學物質的引(yin)入(ru)導致ELISA實驗結果偏差。

5.  若(ruo)樣本(ben)為(wei)細胞(bao)培養(yang)上(shang)清，因該類樣本(ben)干擾(rao)因素(su)較多，如：細胞(bao)狀態(tai)、細胞(bao)數量、采樣時間等(deng)，所(suo)以(yi)可(ke)能存在檢測(ce)不出(chu)的(de)情況(kuang)。

6.  某些天然蛋白(bai)或重組蛋白(bai)，包括原(yuan)核及(ji)真核重組蛋白(bai)，可能因為與本(ben)產品所使用(yong)的檢測抗體及(ji)捕獲抗體不(bu)匹(pi)配(pei)，而不(bu)被(bei)檢測出(chu)。

7.  建議(yi)使用新鮮(xian)樣(yang)本(ben)，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jie)果偏(pian)差。

需要而未(wei)提供的試劑和器材

• 酶標(biao)儀（450nm）
• 高(gao)精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
• 37℃恒溫箱
• 蒸餾(liu)水(shui)或去離子水(shui)

試劑盒組成

備注：

1.  標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL

2.  經過(guo)大量(liang)正常標(biao)本(ben)檢驗，標(biao)本(ben)的(de)正常濃度值(zhi)均在試(shi)劑盒(he)提供的(de)檢測范圍內，實(shi)驗過(guo)程中直接(jie)取50μL樣(yang)本(ben)上(shang)樣(yang)即可。當(dang)有部分樣(yang)本(ben)值(zhi)超過(guo)zui大標(biao)準品濃度時，可用樣(yang)本(ben)稀釋(shi)液將標(biao)本(ben)進(jin)行(xing)適當(dang)稀釋(shi)后再進(jin)行(xing)實(shi)驗。

注意事項

• 嚴格按照規定的(de)時間和溫(wen)度進行溫(wen)育(yu)以保證(zheng)準(zhun)確結果。所有試劑都(dou)必須(xu)在使用(yong)前達到室溫(wen)20-25℃。使用(yong)后立即冷(leng)藏保存試劑。
• 洗板不(bu)(bu)正確可以導致不(bu)(bu)準確的結果。在(zai)加(jia)入底物前確保盡量吸干孔(kong)內(nei)液體。溫(wen)育過程中(zhong)不(bu)(bu)要(yao)讓微(wei)孔(kong)干燥(zao)掉(diao)。
• 消除(chu)板底殘(can)留的液體(ti)和手指印，否則影響OD值。
• 底物顯色(se)液應(ying)呈無色(se)或很淺的(de)顏色(se)，已(yi)經變藍的(de)底物液不能(neng)使用。
• 避免(mian)試劑(ji)和標本(ben)的交(jiao)叉污染(ran)以免(mian)造(zao)成錯誤結(jie)果。
• 在儲存和(he)溫(wen)育(yu)時避免(mian)強光(guang)直接照射。
• 平(ping)衡至室溫后再(zai)打開密封(feng)袋(dai)以防(fang)水滴凝聚在冷(leng)板條上。
• 任何反(fan)應(ying)試(shi)(shi)劑(ji)不能(neng)接(jie)觸漂(piao)(piao)白(bai)(bai)溶(rong)劑(ji)或漂(piao)(piao)白(bai)(bai)溶(rong)劑(ji)所散發的強烈氣體。任何漂(piao)(piao)白(bai)(bai)成分都會破壞試(shi)(shi)劑(ji)盒中反(fan)應(ying)試(shi)(shi)劑(ji)的生物活性(xing)。
• 不能使用過期產品。
• 如果(guo)可能(neng)傳播疾病，所有(you)的樣品都應管(guan)理(li)好，按照(zhao)規定的程序(xu)處(chu)理(li)樣品和(he)檢測(ce)裝置(zhi)。

試(shi)劑準(zhun)備(bei)

試劑盒從冷藏(zang)環境(jing)中取出應在室溫(wen)平衡后(hou)方(fang)可使(shi)用。

20×洗滌緩沖液的稀釋(shi)：蒸餾水按1：20稀釋(shi)，即(ji)1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋(dai)中取出所需(xu)板條(tiao)，剩余板條(tiao)用(yong)自封(feng)袋(dai)密封(feng)放回4℃。

2.  設置標準(zhun)品(pin)孔和樣本孔，標準(zhun)品(pin)孔各(ge)加(jia)不同濃(nong)度的標準(zhun)品(pin)50μL；

3.  樣(yang)本孔中加入待測樣(yang)本50μL；空(kong)白孔不加。

4.  除空白孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)中每孔(kong)加入辣根(gen)過氧(yang)化物酶（HRP）標記的(de)檢(jian)測抗體100μL，用封板膜封住反(fan)應孔(kong)，37℃水浴鍋或恒溫(wen)箱溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄去液(ye)體，吸水紙上(shang)拍干，每孔(kong)加滿洗(xi)(xi)(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置(zhi)1min，甩(shuai)去洗(xi)(xi)(xi)滌(di)液(ye)，吸水紙上(shang)拍干，如此重復洗(xi)(xi)(xi)板5次（也可用洗(xi)(xi)(xi)板機(ji)洗(xi)(xi)(xi)板）。

6.  每孔加(jia)入底(di)物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7.  每(mei)孔加(jia)入終止液50μL，15min內，在450nm波(bo)長(chang)處測定各(ge)孔的OD值。

實驗(yan)結果計(ji)算(suan)

以所測(ce)標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)的OD值為橫(heng)坐標，標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)的濃度值為縱坐標，在(zai)坐標紙(zhi)上或用相關(guan)軟件繪制標準(zhun)曲線，并得到直(zhi)線回歸方程(cheng)，將樣品(pin)(pin)(pin)的OD值代(dai)入方程(cheng)，計算(suan)出樣品(pin)(pin)(pin)的濃度。

試劑(ji)盒性能(neng)

1.  檢測范圍：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。

2.  靈敏度(du)：zui低(di)檢測濃度(du)小于0.1 ng/mL。

3.  特(te)異性(xing)：不與(yu)其它可溶性(xing)結(jie)構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內變異(yi)系數小于10% ，板間變異(yi)系數小于15% 。

說明(ming)

1.  由(you)于(yu)現有條件及科(ke)學(xue)技(ji)(ji)術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分(fen)析，本產品可能存(cun)在一定的質(zhi)量技(ji)(ji)術風險。

2.  zui終的(de)實(shi)(shi)驗結果(guo)與試(shi)劑的(de)有效(xiao)性、實(shi)(shi)驗者的(de)相關操作以及當時的(de)實(shi)(shi)驗環境密(mi)切(qie)相關，請務(wu)必準備充足的(de)標本備份。

3.  不同(tong)批(pi)次的同(tong)一產品可(ke)能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明(ming)書進行實驗操作，電(dian)子版說明(ming)書僅作參考。

4.  只(zhi)有全部(bu)使用本(ben)試劑盒配套試劑才能保證檢(jian)(jian)測效(xiao)果，不能混用其他(ta)商(shang)的(de)產品(pin)。只(zhi)有嚴(yan)格(ge)遵守本(ben)試劑盒的(de)實驗說明才會得到的(de)檢(jian)(jian)測結果。

問(wen)題(ti)解答

若實驗效果不(bu)好，請(qing)及(ji)時對顯色(se)結果拍照(zhao)，保留所用板條及(ji)未(wei)使用試劑(ji)，并妥善保存(cun)，然后我(wo)公司為您(nin)解決(jue)問題。同時您(nin)也可以參(can)考以下資料：