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尿微量白蛋白的檢測方法
更新時間:2023-11-21 點擊次數:288

 目前(qian),尿微量白蛋白的檢測方(fang)法(fa)主(zhu)要有:ELISA方法、放射(she)免(mian)疫(yi)法、化學發(fa)光法、免(mian)疫(yi)透射(she)比濁法以及免(mian)疫(yi)熒光法。

 

  ELISA方法(fa)靈敏性(xing)高(gao)(gao),但操作(zuo)(zuo)(zuo)步驟多,等(deng)待檢(jian)(jian)測(ce)結(jie)果時間(jian)比(bi)(bi)較長(chang),需(xu)(xu)要有門的(de)實驗室、業(ye)人員完成,一(yi)般用于(yu)大批(pi)量(liang)(liang)(liang)標(biao)本的(de)檢(jian)(jian)測(ce)。不適于(yu)少量(liang)(liang)(liang)或單份檢(jian)(jian)測(ce)的(de)快(kuai)速(su)檢(jian)(jian)測(ce)。放射(she)免(mian)疫(yi)法(fa)靈敏度(du)高(gao)(gao)、操作(zuo)(zuo)(zuo)簡便(bian),測(ce)量(liang)(liang)(liang)和數據(ju)處理易于(yu)實現自(zi)動化。但因其(qi)(qi)(qi)為(wei)相對(dui)定量(liang)(liang)(liang)及存在放射(she)線輻(fu)射(she)、污染問題等(deng)應(ying)用較少。化學發(fa)光法(fa)因其(qi)(qi)(qi)特異(yi)性(xing)、敏感(gan)性(xing)高(gao)(gao)、簡便(bian)快(kuai)速(su)、無需(xu)(xu)外來光源(yuan),背景噪音低應(ying)用廣泛,但其(qi)(qi)(qi)選(xuan)擇性(xing)差(cha)(cha)、其(qi)(qi)(qi)發(fa)射(she)強(qiang)度(du)依賴于(yu)各(ge)種(zhong)環境(jing)因素,需(xu)(xu)嚴(yan)格(ge)控制外界(jie)各(ge)種(zhong)因素。免(mian)疫(yi)透射(she)比(bi)(bi)濁法(fa)試劑較穩定,自(zi)動化操作(zuo)(zuo)(zuo)減少了人為(wei)誤差(cha)(cha),但其(qi)(qi)(qi)檢(jian)(jian)測(ce)需(xu)(xu)核實的(de)抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體比(bi)(bi)例,需(xu)(xu)預先定值,否則造成誤差(cha)(cha)。免(mian)疫(yi)熒光法(fa)特異(yi)性(xing)強(qiang)、敏感(gan)性(xing)高(gao)(gao)、操作(zuo)(zuo)(zuo)簡便(bian)、檢(jian)(jian)測(ce)時間(jian)短,即可批(pi)量(liang)(liang)(liang)檢(jian)(jian)測(ce)也(ye)可單份檢(jian)(jian)測(ce),是臨床上常(chang)用的(de)快(kuai)速(su)定量(liang)(liang)(liang)檢(jian)(jian)測(ce)方法(fa)。

 

  (1)尿液標本(ben)的采集

 

  尿常(chang)規檢查所用(yong)的(de)隨機(ji)尿標本雖常(chang)用(yong)但不推薦,24小時尿標(biao)本不易留取,一般(ban)可采(cai)用12小時夜(ye)尿(計量后取0.51ml送化驗室);也可采用shou次晨尿或第二次尿,但注(zhu)意尿液應在(zai)膀胱內(nei)超過3小時。

 

  測(ce)試應(ying)離心后采用上清液。測(ce)試尿微量白(bai)蛋(dan)白(bai)的(de)時間:

 

  1型(xing)糖尿(niao)病(bing):發病(bing)5年或12歲以后,每年測1-3次;

 

  2型糖尿病(bing):診斷明確時測試(shi),以后1-3/年。

 

  僅MAU陽(yang)性者:每3個(ge)月(yue)隨(sui)訪檢測。

 

  (2)尿微量白(bai)蛋白(bai)的測(ce)定

 

  先,應多次(ci)測(ce)定。因為(wei)尿中(zhong)含量的上(shang)落較(jiao)大,單次(ci)測(ce)定可(ke)能會造(zao)成偏差。

 

  如shou次測試為陽(yang)性則應在(zai)3-6個月內(nei)再測二次(ci)以上,如3次(ci)(ci)中有(you)二次(ci)(ci)陽(yang)性則為早期(qi)腎病。

 

  (3)檢(jian)測原理

 

  依據免(mian)疫(yi)熒(ying)光雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心法定(ding)量(liang)(liang)檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)人尿(niao)液(ye)(ye)(ye)標本中(zhong)(zhong)的(de)尿(niao)微量(liang)(liang)白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)含(han)(han)量(liang)(liang)。將檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)和(he)人尿(niao)液(ye)(ye)(ye)樣(yang)(yang)本在檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)管中(zhong)(zhong)進(jin)行混合,緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)中(zhong)(zhong)熒(ying)光標記的(de)抗(kang)人白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)抗(kang)體(ti)和(he)尿(niao)液(ye)(ye)(ye)中(zhong)(zhong)的(de)白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)抗(kang)原結合形成抗(kang)原抗(kang)體(ti)復合物(wu),當混合樣(yang)(yang)本加到(dao)檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)板樣(yang)(yang)品孔(kong)內后,復合物(wu)通(tong)過層析作(zuo)用擴散到(dao)硝酸纖維(wei)素膜的(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)線上并被(bei)檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)線上的(de)人白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)抗(kang)體(ti)所(suo)捕獲。因此尿(niao)液(ye)(ye)(ye)樣(yang)(yang)本中(zhong)(zhong)白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)含(han)(han)量(liang)(liang)越高,檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)線上復合物(wu)積累量(liang)(liang)越多。熒(ying)光抗(kang)體(ti)的(de)信(xin)號(hao)反映了被(bei)捕獲的(de)白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)數量(liang)(liang)。通(tong)過免(mian)疫(yi)熒(ying)光檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)儀可檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)出尿(niao)液(ye)(ye)(ye)樣(yang)(yang)本中(zhong)(zhong)白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)濃(nong)度。檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)儀默(mo)認的(de)尿(niao)微量(liang)(liang)白(bai)(bai)(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)檢(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)結果用mg/L為(wei)單位。尿微量白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)的檢(jian)測(ce)范圍是2~300 mg/L,讀數結果可jing確到0.01 mg/L

 

 


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