雞白細胞介素(su)6（IL-6）elisa試劑盒使用說明(ming)書
本試劑盒僅供研究使(shi)用。
檢(jian)測范圍(wei)： 96T
1 ng/L -40 ng/L
使用目(mu)的(de)：
本(ben)試(shi)劑盒用于(yu)測定雞血(xue)清(qing)，血(xue)漿(jiang)及相關液體樣本(ben)中(zhong)白細胞介素(su)6（IL-6）含量。
實驗(yan)原理(li)
本(ben)試劑盒應用(yong)雙抗體夾心法測定標本中雞白(bai)細胞介素6（IL-6）水平(ping)。用(yong)純化(hua)的雞白細胞(bao)介素6（IL-6）抗(kang)體包(bao)被(bei)(bei)微孔(kong)板，制成固(gu)相抗(kang)體，往(wang)包(bao)被(bei)(bei)單抗(kang)的(de)微孔(kong)中依次加入白細(xi)胞介素6（IL-6），再與HRP標記的白細(xi)胞介(jie)素6（IL-6）抗體(ti)結合，形成抗體(ti)-抗原-酶(mei)標抗(kang)體復合物，經過(guo)che底洗(xi)滌(di)后(hou)加底物(wu)TMB顯色。TMB在HRP酶的(de)(de)催化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，并在酸的(de)(de)作(zuo)用下轉化(hua)成最終的(de)(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)(de)深淺和樣(yang)品中(zhong)的(de)(de)白細胞介素6（IL-6）呈正(zheng)相關。用酶(mei)標儀(yi)在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線(xian)計算(suan)樣(yang)品中雞白細胞介素6（IL-6）濃度。
試劑盒組成(cheng)
1 | 30倍(bei)濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終(zhong)止(zhi)液(ye) | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biao)試劑 | 6ml×1瓶(ping) | 8 | 標準品（80 ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被(bei)板 | 12孔×8條(tiao) | 9 | 標準品稀(xi)釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶(ping) | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶(ping) | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色(se)劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封(feng)袋 | 1個 |
標本要(yao)求
1．標本采集后盡早進(jin)行(xing)(xing)提(ti)取，提(ti)取按相關文獻進(jin)行(xing)(xing)，提(ti)取后應盡快(kuai)進(jin)行(xing)(xing)實驗。若不能馬上(shang)進(jin)行(xing)(xing)試驗，可將標本放于-20℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融
2．不能檢(jian)測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操(cao)作步驟(zou)
1. 標準(zhun)品(pin)的稀釋(shi)：本試(shi)劑盒提(ti)供原倍標準(zhun)品(pin)一支，用戶可按照下列圖(tu)表(biao)在小試(shi)管中進(jin)行稀釋(shi)。
40 ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標(biao)準品加入(ru)150μl標準品稀釋液 |
20 ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入(ru)150μl標準品稀釋液 |
10 ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
5 ng/L | 2號標準品 | 150μl的(de)3號標(biao)準品加入150μl標準品(pin)稀釋液(ye) |
2.5 ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號(hao)標準品加入150μl標準(zhun)品稀釋液 |
2. 加樣(yang)：分別設空白孔(kong)（空白對照孔(kong)不加樣(yang)品及酶標(biao)試劑(ji)，其余各步(bu)操作相同）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣品孔(kong)。在酶標(biao)(biao)包被板上標(biao)(biao)準品準確加樣50μl，待測樣品(pin)(pin)孔(kong)中先加樣品(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加待測樣品(pin)10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將(jiang)樣品加于酶標板孔底部，盡(jin)量不觸及孔壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將(jiang)30倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液用蒸餾水30倍稀(xi)釋(shi)后(hou)備(bei)用
5. 洗滌：小心(xin)揭掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄去液體，甩干(gan)，每孔加滿洗滌液，靜置30秒(miao)后(hou)棄去，如(ru)此(ci)重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biao)試劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外。
7. 溫(wen)育：操作同3。
8. 洗滌(di)：操作(zuo)同(tong)5。
9. 顯(xian)色：每(mei)孔先加入顯(xian)色劑A50μl，再加(jia)入顯色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩混勻，37℃避光顯(xian)色(se)10分(fen)鐘.
10. 終止(zhi)：每孔加終止(zhi)液(ye)50μl，終止反應（此(ci)時(shi)藍色(se)立轉黃色(se)）。
11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測(ce)量各孔的(de)吸光度（OD值）。 測定應在加(jia)終止(zhi)液后15分鐘(zhong)以內進行。
注意事(shi)項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃(nong)洗滌液(ye)可能會有結晶析出，稀釋時(shi)可在水浴(yu)中加溫助溶，洗(xi)滌(di)時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qing)每(mei)次測定的同時做標準(zhun)曲線，最好做復孔。如標本中待(dai)測物質含量過(guo)高（樣本OD值大于標準品孔(kong)第(di)一孔(kong)的OD值），請先用樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)一(yi)定倍數(shu)（n倍）后(hou)再測(ce)定，計算時請(qing)最(zui)后(hou)乘以總(zong)稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性(xing)使用，以避(bi)免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保(bao)存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
